ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА МСММ
Интерпретация результатов
Отклонения от нормы приобретают клиническую значимость, когда численность микроорганизмов изменяется вдвое по сравнению с нормой.
Результат выдается в виде списка определяемых микроорганизмов, допустимых значений нормы и отклонений от нормы, цветовой маркировки «превышений» и «дефицита», а также диаграммы в сопоставлении с нормой. Также прилагается заключение в виде справочной информации по результатам анализа.
В качестве примера результата представлена диаграмма МСММ, отражающая микробиомтощей кишки по крови.
Страница 1 (см. Рисунок 1) приводит результаты количественного в единицах числа клеток на единицу объема (105кл/мл). При наличии показателя «норма» (среднее значение фоновых маркеров микроорганизмов, которые могут обнаруживаться в биоматериале в отсутствие патологии) для исследованного образца, результат приводится в соответствии с нормой и отражается на наглядной диаграмме.
Рисунок.1.Общий вид Страницы 1 отчета.
В зависимости от типа образца отчет содержит три или четыре листа. Три листа содержат отчеты для образцов синовиальной жидкости, бронхоальвеолярного лаважа, смыва трахеи, эякулята, секрета простаты, мазка из уха, отделяемого глаза и носа, дренажа, раневого отделяемого, соскоба кожи, мочи и фекалий. Четыре листа в отчетах для образцов аспиратов из матки, крови, биоптатов тканей, мазков из цериквального канала, уретры, зева, а также вагинального содержимого и слюны.
Страница 2 содержит автоматически формируемое Заключение по пробе, поля для примечаний и сведения об операторе (см. Рисунок 2). Фактически в Заключении приводятся сжатые результаты количественного анализа с Листа 1, где перечислены только микроорганизмы, на которые следует обратить особое внимание лечащему врачу.
Рисунок 2. Общий вид (фрагмент) Страницы 2 отчета.
Страница 3 (см. Рисунок 3) является вспомогательным и содержит последние литературные данные о чувствительности к антибактериальным препаратам со ссылкой на источники. Поля микроорганизмов, обнаруженных в количестве, превышающем уровень клинической значимости, автоматически выделяются цветом.
Рисунок 3. Общий вид (фрагмент) Страницы3 отчета.
Страница 4 (см. Рисунок 4) представляет собой «диаграмму дисбиоза» и визуализирует отклонения от нормы в сторону превышения численности (инфекции) или дефицита мониторируемых микроорганизмов. Страница приводится для образцов из биотопов, описанных с точки зрения состава микробного сообщества, которые не только имеют охарактеризованные значения фоновых маркеров, как нормы, но и имеют микробиоценоз определенного состава у здоровых людей, отклонение от которого («дисбиоз») является угрозой возникновения патологических процессов, в том числе инфекционного характера.
Рисунок 4. Общий вид (фрагмент) Страницы4 отчета.
Оценка микробиоты кишечника по анализу крови
Наибольшей информативностью при оценке микроэкологического статуса организма является исследование именно пристеночной микробиоты кишечника (мукозная микробиота), а не микробиоты фекалий.
Согласно исследованиям, гомеостаз микробных маркеров в крови (Осипов, 2003) соответствует профилю кишечной микробиоты, что обеспечивает уникальную возможность мониторировать состояние микробиоты кишечника по анализу крови.
Наличие маркеров микроорганизмов в крови обусловлено механизмом иммунного ответа на появление возбудителя. Фагоцитирующие клетки адсорбируют и перерабатывают антигены микроорганизмов и выводят продукты лизиса в лимфатическую и кровеносную систему. Учитывая, что большая часть фагоцитирующих клеток крови находится в межклеточном пространстве и свободно проходит через стенки сосудов, исследователи полагают (предполагается), что независимо от очага воспаления микробные маркеры постоянно и быстро поступают в кровь вместе с фагоцитами и белками переносчиками. То есть наличие микробных маркеров в крови отражает состав микробных сообществ тела человека, независимо от места обитания микроорганизмов или очага воспаления. Таким образом, компоненты микробных клеток могут быть определены в крови чувствительным аналитическим методом, каковым является метод ГХ-МС. При этом активные микробные клетки в крови отсутствуют, посев крови на питательные среды, как правило, дает отрицательный результат, за исключением случаев бактериемии.
Одновременное исследование крови пациентов показало соответствие состава микробных ЖК, альдегидов и стеролов в биоптате тонкой кишке и в крови. Показана количественная адекватность изменений их концентраций при дисбактериозе, ассоциированном с синдромом раздраженной тонкой кишки, болезнью Крона и псориазом. Это означает возможность неинвазивной оценки изменений микробиоты кишечника по данным анализа крови методом МСММ.
Рисунок 5. Сопоставление концентрации маркеров микроорганизмов в кишечной стенке и крови
Интерпретация данных МСММ
Клиническая процедура при использовании МСММ претерпевает существенные изменения, связанные с увеличением объема микробиологической информации по каждой пробе больного, сокращением времени анализа до трех часов, вместо недель и появлением в результатах непривычных для микробиолога и врача редко культивируемых микроорганизмов – большинства анаэробов, актинобактерий и других. В период накопления нового клинического опыта, необходимого для разработки оперативных алгоритмов решения и их формализации в виде протокольных разрешительных документов (методик, пособий, статей в Госреестре и т.п.) она выглядит следующим образом:
Клиническая процедура детектирования микробных маркеров выглядит следующим образом:
Группа мажорных значений результатов представляет основную микробиоту («микрофлору») тощей кишки – бифидобактерии, лактобациллы, эубактерии, пропионобактерии, клостридии. Это основной микроэкологический статус пациента. В списке микроорганизмов второго плана обычно присутствуют маркеры микроорганизмов инфекционной составляющей, маркеры, которые поступают в кровь из инфицированных органов.
По первичному анализу назначение антибиотиков производится в отношении микроорганизмов, проявляющих избыточный рост – увеличение численности более чем вдвое по сравнению с нормой. Метод МСММ подтверждает, что в зоне воспаления можно обнаружить весь списочный состав микробов организма человека. Измерения методом масс-спектрометрии микробных маркеров in situ выявляет новую группу микроорганизмов из числа трудно культивируемых, и поэтому, мало известных в клинической практике. Эти участники инфекционного процесса — клостридии, эубактерии, лактобациллы, хеликобактеры, стрептомицеты, родококки — обладают высокой патогенетической активностью. Она известна из специфически связанных с этими организмами нозологий, каждая из которых воспринимается сама по себе как серьезное заболевание, трудно поддающееся лечению. Клостридии групп C. perfringens и C. ramosum (группа RIC – ramosum, inocuum, clostridioforme) – это гангрена, Eubacterium – септический артрит, Lactobacillus – септицемия и эндокардит, H. pylory –язвенная болезнь желудка, языка и атеросклероз; Streptomyces и другие актинобактерии — туберкулез, нокардиозы и актиномикозы.
Отклонения от нормы приобретают клиническую значимость, когда численность микроорганизмов изменяется вдвое по сравнению с нормой.
Результат выдается в виде списка определяемых микроорганизмов, допустимых значений нормы и отклонений от нормы, цветовой маркировки «превышений» и «дефицита», а также диаграммы в сопоставлении с нормой. Также прилагается заключение в виде справочной информации по результатам анализа.
В качестве примера результата представлена диаграмма МСММ, отражающая микробиомтощей кишки по крови.
Страница 1 (см. Рисунок 1) приводит результаты количественного в единицах числа клеток на единицу объема (105кл/мл). При наличии показателя «норма» (среднее значение фоновых маркеров микроорганизмов, которые могут обнаруживаться в биоматериале в отсутствие патологии) для исследованного образца, результат приводится в соответствии с нормой и отражается на наглядной диаграмме.
Рисунок.1.Общий вид Страницы 1 отчета.
В зависимости от типа образца отчет содержит три или четыре листа. Три листа содержат отчеты для образцов синовиальной жидкости, бронхоальвеолярного лаважа, смыва трахеи, эякулята, секрета простаты, мазка из уха, отделяемого глаза и носа, дренажа, раневого отделяемого, соскоба кожи, мочи и фекалий. Четыре листа в отчетах для образцов аспиратов из матки, крови, биоптатов тканей, мазков из цериквального канала, уретры, зева, а также вагинального содержимого и слюны.
Страница 2 содержит автоматически формируемое Заключение по пробе, поля для примечаний и сведения об операторе (см. Рисунок 2). Фактически в Заключении приводятся сжатые результаты количественного анализа с Листа 1, где перечислены только микроорганизмы, на которые следует обратить особое внимание лечащему врачу.
Рисунок 2. Общий вид (фрагмент) Страницы 2 отчета.
Страница 3 (см. Рисунок 3) является вспомогательным и содержит последние литературные данные о чувствительности к антибактериальным препаратам со ссылкой на источники. Поля микроорганизмов, обнаруженных в количестве, превышающем уровень клинической значимости, автоматически выделяются цветом.
Рисунок 3. Общий вид (фрагмент) Страницы3 отчета.
Страница 4 (см. Рисунок 4) представляет собой «диаграмму дисбиоза» и визуализирует отклонения от нормы в сторону превышения численности (инфекции) или дефицита мониторируемых микроорганизмов. Страница приводится для образцов из биотопов, описанных с точки зрения состава микробного сообщества, которые не только имеют охарактеризованные значения фоновых маркеров, как нормы, но и имеют микробиоценоз определенного состава у здоровых людей, отклонение от которого («дисбиоз») является угрозой возникновения патологических процессов, в том числе инфекционного характера.
Рисунок 4. Общий вид (фрагмент) Страницы4 отчета.
Оценка микробиоты кишечника по анализу крови
Наибольшей информативностью при оценке микроэкологического статуса организма является исследование именно пристеночной микробиоты кишечника (мукозная микробиота), а не микробиоты фекалий.
Согласно исследованиям, гомеостаз микробных маркеров в крови (Осипов, 2003) соответствует профилю кишечной микробиоты, что обеспечивает уникальную возможность мониторировать состояние микробиоты кишечника по анализу крови.
Наличие маркеров микроорганизмов в крови обусловлено механизмом иммунного ответа на появление возбудителя. Фагоцитирующие клетки адсорбируют и перерабатывают антигены микроорганизмов и выводят продукты лизиса в лимфатическую и кровеносную систему. Учитывая, что большая часть фагоцитирующих клеток крови находится в межклеточном пространстве и свободно проходит через стенки сосудов, исследователи полагают (предполагается), что независимо от очага воспаления микробные маркеры постоянно и быстро поступают в кровь вместе с фагоцитами и белками переносчиками. То есть наличие микробных маркеров в крови отражает состав микробных сообществ тела человека, независимо от места обитания микроорганизмов или очага воспаления. Таким образом, компоненты микробных клеток могут быть определены в крови чувствительным аналитическим методом, каковым является метод ГХ-МС. При этом активные микробные клетки в крови отсутствуют, посев крови на питательные среды, как правило, дает отрицательный результат, за исключением случаев бактериемии.
Одновременное исследование крови пациентов показало соответствие состава микробных ЖК, альдегидов и стеролов в биоптате тонкой кишке и в крови. Показана количественная адекватность изменений их концентраций при дисбактериозе, ассоциированном с синдромом раздраженной тонкой кишки, болезнью Крона и псориазом. Это означает возможность неинвазивной оценки изменений микробиоты кишечника по данным анализа крови методом МСММ.
Рисунок 5. Сопоставление концентрации маркеров микроорганизмов в кишечной стенке и крови
Интерпретация данных МСММ
Клиническая процедура при использовании МСММ претерпевает существенные изменения, связанные с увеличением объема микробиологической информации по каждой пробе больного, сокращением времени анализа до трех часов, вместо недель и появлением в результатах непривычных для микробиолога и врача редко культивируемых микроорганизмов – большинства анаэробов, актинобактерий и других. В период накопления нового клинического опыта, необходимого для разработки оперативных алгоритмов решения и их формализации в виде протокольных разрешительных документов (методик, пособий, статей в Госреестре и т.п.) она выглядит следующим образом:
Клиническая процедура детектирования микробных маркеров выглядит следующим образом:
- Определение биологических проб, подлежащих анализу в соответствии с диагнозом или симптомами заболевания, если диагноз отсутствует
- Проведение анализа по полному алгоритму масс-спектрометрии микробных маркеров
- Составление заключения специалиста-интерпретатора по особенностям результатов анализа по особенностям результатов по отношению к норме и их значимости
- Анализ специфики заболевания и связанных с ним микроорганизмов с измененной концентрацией и оценка их причастности к конкретной патологии
- Поиск информации в собственной базе данных или Интернет по специфике заболевания и связанных с ним микроорганизмов с измененной концентрацией и оценка их причастности к конкретной патологии
- Выбор системных продуктов здоровья по данным рапорта МСММ или поиск в Интернет, если необходимо подавление избыточного роста численности микроорганизма при воспалениях, сепсисе, инфекциях ткани и избыточном росте микробиоты кишечника или УГТ и прочего
- Назначение системных продуктов здоровья для разрушения биопленок патогенных бактерий.
- Назначение антибиотиков природного происхождения производится в отношении микроорганизмов, проявляющих избыточный рост – увеличение численности более чем вдвое по сравнению с нормой.
- Спустя месяц после приёма системных продуктов здоровья производится повторный ГХ-МС анализ. На основании повторного анализа определяется эффективность назначения и проводится его коррекция с учетом микроорганизмов, не изменившим численность, а тем более обнаруживающих ее наращивание или конкурентный рост, как оппортунистическая микробиота. Экспрессность метода позволяет мониторировать лечение.
- Выбор стимуляторов роста микробов, если их дефицит угрожает нарушением физиологического гомеостаза макроорганизма
- Определение других мер для восстановления гомеостатической нормы органа или микроэкологического статуса организма клиента в целом, включающих иммуностимуляторы, пробиотики, пребиотики, энтеросорбенты, микроэлементы и т.п., а также диетические и процедурные назначения, нормализующие деятельность кишечника и других органов, содержащих слизистые оболочки или иные компартменты обитания симбиотноймикробиоты
- Контроль за реакцией клиента на принятую терапию – мониторинг и коррекция лечения
Группа мажорных значений результатов представляет основную микробиоту («микрофлору») тощей кишки – бифидобактерии, лактобациллы, эубактерии, пропионобактерии, клостридии. Это основной микроэкологический статус пациента. В списке микроорганизмов второго плана обычно присутствуют маркеры микроорганизмов инфекционной составляющей, маркеры, которые поступают в кровь из инфицированных органов.
По первичному анализу назначение антибиотиков производится в отношении микроорганизмов, проявляющих избыточный рост – увеличение численности более чем вдвое по сравнению с нормой. Метод МСММ подтверждает, что в зоне воспаления можно обнаружить весь списочный состав микробов организма человека. Измерения методом масс-спектрометрии микробных маркеров in situ выявляет новую группу микроорганизмов из числа трудно культивируемых, и поэтому, мало известных в клинической практике. Эти участники инфекционного процесса — клостридии, эубактерии, лактобациллы, хеликобактеры, стрептомицеты, родококки — обладают высокой патогенетической активностью. Она известна из специфически связанных с этими организмами нозологий, каждая из которых воспринимается сама по себе как серьезное заболевание, трудно поддающееся лечению. Клостридии групп C. perfringens и C. ramosum (группа RIC – ramosum, inocuum, clostridioforme) – это гангрена, Eubacterium – септический артрит, Lactobacillus – септицемия и эндокардит, H. pylory –язвенная болезнь желудка, языка и атеросклероз; Streptomyces и другие актинобактерии — туберкулез, нокардиозы и актиномикозы.